• 2020年第37卷第10期文章目次
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    • >封面与目次
    • 封面与目次

      2020, 37(10).

      摘要 (106) HTML (0) PDF 11.19 M (275) 评论 (0) 收藏

      摘要:

    • >流行病学
    • 辽宁省一起小反刍兽疫疫情的紧急流行病学调查

      2020, 37(10):1-6. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.001

      摘要 (171) HTML (0) PDF 2.19 M (306) 评论 (0) 收藏

      摘要:2020年5月15日,辽宁省抚顺市清原县动物疫病预防控制中心报告,该县某养羊户发生山羊急性发病,且死亡率较高;5月16日,经市级专家组现场临床诊断和省级实验室复核,诊断为疑似小反刍兽疫疫情,经国家小反刍兽疫参考实验室检测,确诊为小反刍兽疫。5月18日,农业农村部公布了该起疫情。为追溯疫情可能来源,分析疫情扩散风险,科学指导疫情处置工作,开展了紧急流行病学调查。现场调查结果显示,该起疫情的袭击率为72.7%(136/187),病死率为55.9%(76/136)。溯源调查表明,疫情由羊贩运人及其运输车辆带毒传入和外购未经检疫羔羊带毒传入的风险较大,新生或外购羔羊未及时免疫小反刍兽疫疫苗是内在风险因素;追踪调查结果显示,疫情局限于该养羊户,向外扩散的风险较低。本起疫情提示,应做好养殖场区内的生物安全综合防控,重点加强相关人员及运输车辆、工具的移动控制,及时做好羔羊的疫苗免疫,降低疫情发生风险。

    • 安徽省一起牛结节性皮肤病的暴发调查

      2020, 37(10):7-10. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.002

      摘要 (181) HTML (0) PDF 1.21 M (390) 评论 (0) 收藏

      摘要:2020年6月28日,安徽省在排查中发现,黄山市休宁县一养牛户饲养的黄牛发生疑似牛结节性皮肤病。安徽省相关部门随即组成专项工作组赴现场开展了暴发调查,并采集牛全血、皮肤结节、鼻/口腔拭子样品进行了PCR检测。综合流行病学特征以及病理剖检、实验室检测结果,并经国家外来动物疫病研究中心复检,证实该暴发是由牛结节性皮肤病病毒感染引起的牛结节性皮肤病。调查推测,本暴发很可能是由虫媒或进出人员、交通工具等带入病毒引起的。建议加强对节肢动物的控制和扑灭,对养殖场、周围河流、农田等区域采取灭蚊、灭蝇措施;加强养殖场的生物安全管理,严格人员及车辆的进出场控制与消毒;全面开展牛结节性皮肤病防治技术的宣传和培训,让养殖户深入了解牛结节性皮肤病,从而更好地开展疫病防控工作。本调查为牛结节性皮肤病的预防与控制提供了参考。

    • 2019年湖南省规模牛场4种疫病血清学调查

      2020, 37(10):11-15. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.003

      摘要 (105) HTML (0) PDF 451.94 K (257) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解湖南省规模牛场牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎、牛结核病、牛副结核病4种疫病的流行状况,采用ELISA方法,对全省未免疫以上4种疫病的规模牛场开展了血清学调查。结果显示:湖南省规模牛场的牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎、牛结核病、牛副结核病的场阳性率分别为51.35%、74.32%、13.64%、22.73%,个体阳性率分别为23.54%、45.45%、3.11%、4.67%。全省14个市州规模牛场均检出牛病毒性腹泻与牛传染性鼻气管炎病原抗体阳性,4个市州检出牛分枝杆菌抗体阳性,7个市州检出副结核分枝杆菌抗体阳性;不同规模牛场4种疫病的抗体阳性率存在一定差异,大规模场偏高;多重感染占比为45.45%。结果表明:牛病毒性腹泻和牛传染性鼻气管炎在湖南省规模牛场流行较为普遍、严重,部分地区还存在牛结核病、牛副结核病流行,而在大规模牛场4种疫病流行更为严重,各规模牛场4种疫病病原的多重感染情况也较为普遍。因此,湖南省规模牛场4种疫病防控形势严峻,需加强防控。本调查为湖南省此类疫病防控提供了数据参考。

    • 云南省边境地区送检牛血清样品蓝舌病病毒抗体检测与血清型鉴定

      2020, 37(10):16-20. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.004

      摘要 (86) HTML (0) PDF 513.77 K (254) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解云南边境地区的蓝舌病流行和分布情况,采用竞争ELISA方法,2019年对云南省边境地区5个州市12个县(市)的1 580份牛血清样品进行蓝舌病病毒抗体检测,同时从检出的阳性血清中,每县(市)随机选取15~55份,采用微量血清中和试验进行血清型鉴定。结果显示:12个边境县(市)均检出阳性血清样品,但有一定的地区差异,其中芒市最高(94.1%),沧源县最低(17.0%);本地牛和境外牛血清样品阳性率差异不大(P>0.05),均在70.0%以上;各县(市)均存在5个以上血清型的交叉感染。结果表明,蓝舌病在云南边境地区广泛存在,且呈多种血清型混合流行态势,需要持续开展血清学调查。本研究为我国西南边境地区蓝舌病防控提供了数据参考。

    • 我国部分地区送检样品3种常见猪病血清学和病原学检测

      2020, 37(10):21-26. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.005

      摘要 (121) HTML (0) PDF 1003.33 K (271) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解我国部分地区猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪伪狂犬病3种常见疫病的流行情况,采用ELISA、聚合酶链式反应(PCR)和反转录PCR(RT-PCR)等方法,对2019年11个省(自治区)172个猪场送检的3 550份猪血清样品进行猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及伪狂犬病野毒(PRV-gE)抗体检测,对9个省(自治区)72个猪场送检的371份病料进行抗原检测。结果显示:CSFV、PRRSV、PRV-gE抗体阳性率分别为82.75%、84.08%、31.86%,抗原阳性率分别为2.62%、26.15%、1.67%。保育猪群CSFV抗体平均阻断率最低,为44.62%,抗体整齐度差,CV为58.26%,且CSFV抗原主要在哺乳仔猪和保育猪病料中被检出,检出率分别为3.57%、3.00%;除育肥猪群外,其他各阶段猪群的PRRSV抗体S/P平均值为1.0~2.0,抗体整齐度整体较差,且平均抗原阳性率较高(26.15%),其中保育阶段猪群病原检出率最高(37.68%);育肥猪、母猪、公猪的PRV-gE抗体阳性率分别为36.82%、35.31%、15.65%,病原主要从死胎/木乃伊胎和哺乳仔猪病料中被检出,检出率分别为8.70%和2.99%。结果表明,PRRSV对我国猪场不同阶段猪群均有较大威胁;保育猪群CSFV抗体水平不理想,暴发疫情风险较高;公猪、母猪及育肥猪群普遍存在PRV感染,尤其是母猪。提议各猪场采取免疫、监测、净化等综合措施,加强这3类常见猪群疫病的防控。

    • 罗非鱼湖病毒病传入风险分析

      2020, 37(10):27-31. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.006

      摘要 (102) HTML (0) PDF 466.07 K (262) 评论 (0) 收藏

      摘要:为评估罗非鱼湖病毒(tilapia lake virus,TiLV)跨境传入风险,按照OIE传入风险评估框架,从危害识别、风险评估及风险管理3个方面,开展了TiLV跨境传入风险分析,并提出了相应的风险控制措施。分析认为:活的敏感鱼类(包括亲鱼、鱼卵和鱼苗),用做鲜活饵料的鱼类(野杂鱼)及冰冻和冰鲜的敏感鱼类(包括去除内脏的鱼肉)TiLV传入风险较高,而敏感鱼加工类产品、非敏感鱼类(包括活的和其他形式的产品)及运输活鱼的水、包装、运输工具和用具等传入风险较低。建议不从疫区进口高风险产品,对于低风险产品可以自由贸易,而对运输活鱼的水、包装、运输工具和用具等要进行强制常规消毒。

    • 动物防疫条件审查选址风险评估体系构建

      2020, 37(10):32-37. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.007

      摘要 (164) HTML (0) PDF 644.81 K (311) 评论 (0) 收藏

      摘要:为科学、合理评价动物防疫条件审查中有关动物饲养场、养殖小区、动物隔离场、动物屠宰加工场、动物和动物产品无害化处理场(简称“五类场所”)选址的问题,运用OIE《陆生动物卫生法典》提供的风险分析方法,综合考虑场所周边屏障、动物疫病流行情况、动物分布、公路交通、设计规划、废弃物处理、无害化处理以及场所间的相互影响、对居民和环境的影响、沟通等方面因素,作出消除风险能力高低的判断,从而构建动物防疫条件审查选址风险评估体系,以期为落实农业农村部有关规定,实施动物防疫条件审查提供技术支持,也为相关企业兴办“五类场所”提供参考。

    • >公共卫生
    • 新疆南疆地区村级防疫员布鲁氏菌病防控认知情况调查

      2020, 37(10):38-41. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.008

      摘要 (97) HTML (0) PDF 604.91 K (270) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解新疆南疆地区村级防疫员对布鲁氏菌病防控相关知识的认知、态度和行为以及可能存在的问题,2018—2019年,对新疆南疆地区3批共115名村级防疫员培训学员采用问卷调查方式进行普查,并对调查数据进行统计分析。结果显示:2018—2019年3批村级防疫员培训学员对布鲁氏菌病防控相关知识的认知率为79.8%,知晓率为83.2%;92.4%的学员对布鲁氏菌病防控持积极态度,57.7%能在检疫过程中准确使用防护用具。在希望获取信息的途径中,专业兽医和传统宣传资料依然是该地区村级防疫员获得信息的主要途径,同时通过网络和电视获取信息的比例也在升高,而部分学员提出通过培训来获取有效信息的方法也值得借鉴。结果表明,新疆南疆地区村级防疫员对布鲁氏菌病防控相关知识的掌握度还有待提高,在进行相关知识宣传时,应注意宣传的多样性和针对性。本调查为进一步提高村级防疫员对布鲁氏菌病的防控认知,做好布鲁氏菌病防控提供了依据。

    • 吉林和黑龙江两省猪鸡源产ESBLs大肠杆菌耐药检测与优势基因型分析

      2020, 37(10):42-48. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.009

      摘要 (84) HTML (0) PDF 510.62 K (244) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解吉林和黑龙江两省猪鸡源产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠杆菌菌株的流行分布及耐药特征,分析其优势基因型和基因亚型,依据美国临床实验室标准化委员会(CLSI)标准,对分离自吉林和黑龙江两省的210株大肠杆菌进行ESBLs表型检测,采用微量肉汤稀释法和PCR方法进行药物敏感性试验和耐药基因检测,采用SPSS软件中的卡方检验方法进行数据处理与统计分析。结果显示:①产ESBLs菌株检出率为34.76%,两省检出率差异不显著(P=0.54),鸡源产ESBLs菌株检出率极显著高于猪源(P<0.01)。②210株大肠杆菌对四环素(90.95%)和磺胺异噁唑(80.00%)最为耐药,鸡源大肠杆菌对13种药物的耐药率高于猪源,吉林省分离菌株对10种药物的耐药率高于黑龙江省;产ESBLs菌株对13种药物的耐药率高于非产ESBLs菌株。③210株大肠杆菌多重耐药率为83.33%,猪源菌株多重耐药率(77.57%)低于鸡源(89.32%),差异显著(P=0.022),但两省之间差异不显著(P=0.360);不同动物来源、不同地区间的产ESBLs菌株多重耐药率差异均不显著(P>0.05)。④73株产ESBLs菌株主要基因型为CTX-M型(97.26%),其次为TEM型(50.68%),OXA型仅在鸡源中检出,两种来源菌株中均未检出SHV型。结果表明:产ESBLs菌株在吉林和黑龙江两省的猪鸡群中均有流行,且耐药严重,鸡源菌株比猪源耐药严重;CTX-M型和TEM型为两省猪鸡源产ESBLs大肠杆菌的主要流行基因型。本研究为指导大肠杆菌病防控的临床合理用药,有效控制产ESBLs菌株流行提供了依据。

    • >兽医管理
    • 青岛市黄岛区城市人群猪肉消费意愿及影响因素调查

      2020, 37(10):49-56. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.010

      摘要 (78) HTML (0) PDF 1.99 M (303) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解非洲猪瘟防控背景下城市消费者猪肉消费意愿及影响因素,以青岛市黄岛区350位消费者调查数据为样本,对数据进行描述性统计、交叉列联表分析、卡方检验分析,采用多项Logistic模型对消费者购买猪肉意愿及影响因素进行分析,通过逐步回归法剔除不显著变量。结果发现:家庭常住人口数越大、家庭人均月收入越多、对食品安全的评价越高的消费者对猪肉购买意愿越强;认为猪肉会携带非洲猪瘟病毒的消费者则不愿意购买猪肉;年龄、性别、学历等因素对消费者购买猪肉意愿的行为影响不显著。这提示应加强生猪稳产、保供复养工作,加大猪肉市场监管力度,增强消费者安全意识,提升品牌企业责任感。本研究为优化管理政策及措施提供了信息支持。

    • 河南省郑州市非洲猪瘟PCR实验室建设现状及对策

      2020, 37(10):57-60. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.011

      摘要 (101) HTML (0) PDF 383.55 K (261) 评论 (0) 收藏

      摘要:非洲猪瘟PCR实验室是非洲猪瘟防控体系建设的重要组成部分,在非洲猪瘟诊断中发挥重要作用。随着市、县和相关企业非洲猪瘟PCR实验室的发展建设,郑州市形成了逐步完善的非洲猪瘟检测体系,有力保障了非洲猪瘟的早发现与早处置。但由于建成时间短,面临基础设施建设薄弱、人员业务素质偏低、检测技术能力参差不齐、建设资金不足和管理水平落后等问题。建议加大资金投入,加强基础设施和技术人员队伍建设,引进实验室信息管理先进模式,强化生物安全管理。本文以期为全市非洲猪瘟PCR实验室建设发展提供参考。

    • 欧美有关国家生猪运输环节生物安全措施及启示

      2020, 37(10):61-65. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.012

      摘要 (99) HTML (0) PDF 436.02 K (263) 评论 (0) 收藏

      摘要:我国生猪等动物及其产品的跨区域调运十分频繁,运输过程中受空间狭窄、卫生条件简陋、运输路径复杂等因素影响,动物疫病传播风险较大。因此,针对生猪运输中的风险因素,建立科学有效的生物安全管理制度,对防范疫情传播具有重要意义。本文梳理和总结了欧美有关国家生猪运输环节中采取的关键生物安全措施和科学的管理制度,包括运输人员管理、运输车辆许可、运输计划审查、启运许可、运输途中生物安全、落地报备、运输车辆清洗消毒及特殊动物禁运制度,并结合我国实际,提出了强化调运前检疫和移动监管,加强生猪运输车辆管理、加大违法调运打击力度等生猪运输环节监管的建议,以期为我国生猪运输安全水平的提高提供参考。

    • >监督执法
    • 新修订《农业行政处罚程序规定》的学习体会

      2020, 37(10):66-70. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.013

      摘要 (112) HTML (0) PDF 455.93 K (389) 评论 (0) 收藏

      摘要:新修订《农业行政处罚程序规定》调整了农业行政处罚的适用范围,完善了农业行政处罚的管辖,规范了农业行政处罚的立案程序,规范了农业行政处罚的调查取证行为,严格了农业行政处罚的决定和送达程序,健全了农业行政处罚的期限制度等内容。修订内容体现了规范执法行为,保护行政相对人合法权益的基本要求,对农业行政处罚工作影响重大而深远。农业行政执法人员应正确理解修订的主要特点,熟练掌握修订的主要内容,注意规定实施中的问题,切实做好贯彻实施工作,提高依法行政水平。

    • 人工饲养野生动物现状调查及检疫监管思考

      2020, 37(10):71-75. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.014

      摘要 (115) HTML (0) PDF 564.19 K (291) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解我国人工饲养野生动物的现状,分析了当前野生动物养殖的种类、规模、分布以及关注热点,探讨了《野生动物保护法》《动物防疫法》规定的应当附有检疫证明的野生动物范围,产地检疫过程中判断可开展检疫的野生动物品种、调查野生动物的来源、实施详细具体检疫的步骤,养殖、运输、流通环节的监管等问题,提出了推动完善法律法规,加大野生动物疫病的研究与监测力度,加强部门监管与协作的对策,为完善人工饲养野生动物疫病防控和检疫监管提供参考。

    • 关于完善野生动物防疫检疫管理体系的思考

      2020, 37(10):76-79. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.015

      摘要 (100) HTML (0) PDF 404.56 K (267) 评论 (0) 收藏

      摘要:野生动物的防疫检疫管理对公共卫生安全至关重要。本文将梳理与野生动物防疫检疫管理相关的法律法规,并结合在实际防疫检疫执法过程中面临野生动物溯源困难、缺少检疫标识、滥食野生动物等问题,提出科学客观定义野生动物,完善野生动物防疫法及检疫规程,明确各执法部门职责,搭建圈养野生动物信息管理平台,支持野生动物疫源疫病研究和专用疫苗开发等建议,以期为完善野生动物的防疫检疫管理体系提供参考。

    • >专论综述
    • 国内外奶牛疫病预警监测技术发展现状

      2020, 37(10):80-86. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.016

      摘要 (152) HTML (0) PDF 522.10 K (277) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解国内外奶牛疫病预警技术及其应用现状,归纳了奶牛疾病的预警要求,分析了国内外8种疫病预警技术的发展现状及其在奶牛养殖中存在的局限性。一是兽医巡检预警技术:该技术较为成熟,但不能满足大规模养殖牛场迅速、高效预警的需求。二是奶样体细胞数测定技术:可初步诊断隐性乳腺炎,但需要额外细菌培养和检测确诊。三是奶牛群体改良测定技术:以监测生产性能为主,仅可预警奶牛乳腺炎及酮病。四是计步器及发情、反刍项圈预警技术:同时具备发情与反刍监测功能,但仅适用于牛群的发情与反刍监测。五是大数据挖掘技术:在数据库基础上,利用各种模型或算法预测传染病的发生和发展,但预警效率受限。六是智能化体温连续远程监测及预警技术:可预警口蹄疫等重大传染病,但无法完全替代临床诊断,不能监测病原微生物。七是基于AI和群体热成像的奶牛行为分析技术:可以监视记录奶牛行为与温度特征,锁定病畜,但对发病初期无异常行为的牛只无效。八是生物气溶胶激光光谱测量技术:通过检测病原微生物种类和浓度,达到预警疫病的目的,目前主要用于军方监测人类重大疫病。未来的奶牛疫病预警技术需要进一步相互结合、取长补短,充分利用大数据、物联网等新兴技术进行奶牛重大疫病预警诊断。本文为预警监测技术的本地化发展提供了参考。

    • 犬冠状病毒研究进展

      2020, 37(10):87-91. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.017

      摘要 (94) HTML (0) PDF 513.55 K (901) 评论 (0) 收藏

      摘要:2020年2月,我国香港报道了新冠肺炎(COVID-19)患者家养的宠物犬感染了新型冠状病毒(SARS-CoV-2),这引起了人们对犬冠状病毒的关注。为有助于人们全面了解犬冠状病毒,做好犬冠状病毒病防治,本文从病原学与流行病学、临床症状以及诊断和防治措施等方面进行了综述。犬冠状病毒在犬群中广泛存在,主要包括α冠状病毒属的犬肠炎冠状病毒和β冠状病毒属的犬呼吸道冠状病毒。犬冠状病毒致病性不强,引起的临床症状通常较轻,但对幼犬或与犬细小病毒、犬瘟热病毒等发生混合感染时,会引起较严重症状,且易发生突变,产生新的变异毒株,具有致病性增强的风险。目前,犬冠状病毒检测方法主要包括病原学检测、血清学检测以及RT-PCR、qRT-PCR、纳米PCR等分子生物学检测。犬冠状病毒感染的防治主要通过疫苗免疫以及科学饲养管理、卫生消毒和对症治疗等综合措施。虽然犬可感染SARS-CoV-2,但尚不清楚感染犬是否可将病毒再传染给其他动物或人类。因此,应加强犬冠状病毒的病原生态学研究和监测预警。

    • >技术支撑
    • 严重急性呼吸综合征冠状病毒2型4种结构蛋白特性分析

      2020, 37(10):92-98. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.018

      摘要 (98) HTML (0) PDF 1.17 M (258) 评论 (0) 收藏

      摘要:为深入了解严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)S、M、E、N蛋白的分子生物学特征和基本结构特征,选取S、M、E、N蛋白序列进行生物信息学分析和预测,使用DNAstar、SignalP、TMHHM、PSORT Prediction、BUSCA和ABCpred软件,分析并相互验证4种蛋白的结构域特征和S蛋白的潜在B细胞抗原表位,结果预测出了4种结构蛋白的功能结构域,并分析预测出S蛋白潜在的B细胞抗原表位为25~29、75~81、112~116、148~152、773~779 aa。研究结果可为SARS-CoV-2相关的分子生物学和结构生物学研究提供参考,并为疫苗开发等提供理论依据。

    • 牛巴贝斯虫TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

      2020, 37(10):99-103. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.019

      摘要 (109) HTML (0) PDF 1.07 M (263) 评论 (0) 收藏

      摘要:为建立一种灵敏、特异、快速的牛巴贝斯虫检测方法,针对牛巴贝斯虫Rap-1a基因设计引物进行PCR扩增,然后构建重组质粒制作标准品,经过优化反应体系、绘制标准曲线,建立了牛巴贝斯虫TaqMan荧光定量PCR方法,并进行灵敏度、特异性及稳定性检测,同时利用该方法对37份田间样品进行检测。结果显示:建立的牛巴贝斯虫TaqMan荧光定量PCR检测方法的标准曲线方程式为y=-3.362×Log(X)+43.32,相关系数R2=0.999,扩增效率为98.4%。该方法的灵敏度为1.0×102 copies/μL,是普通PCR(1.0×104 copies/μL)的100倍。该方法对牛双芽巴贝斯虫、大巴贝斯虫、卵形巴贝斯虫等7种常见的牛梨形虫病检测结果均为阴性,组内和组间重复试验的变异系数均小于2.5%,37份田间样品的阳性检出率为67.5%。结果表明,本试验建立的牛巴贝斯虫TaqMan荧光定量PCR灵敏度高,且特异、稳定,适用于牛巴贝斯虫的诊断,从而为其流行病学调查提供了快速有效的检测方法。

    • 血清型特异性水泡性口炎病毒同步检测和鉴别方法的建立

      2020, 37(10):104-108. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.020

      摘要 (76) HTML (0) PDF 1.12 M (270) 评论 (0) 收藏

      摘要:为准确地鉴别诊断新泽西型水泡性口炎病毒(VSV-NJ)和印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IND),本研究建立了可以同时检测和鉴别诊断VSV-NJ和VSV-IND的双重荧光RT-PCR方法,并对方法性能进行了测试和初步应用。结果显示,建立的双重荧光RT-PCR特异性为100%,最低检测限1~10个拷贝/μL,扩增效率E值均在99%左右,R2值分别为0.999和0.998。VSV-NJ和VSV-IND单荧光RT-PCR与双重荧光RT-PCR的相关性系数分别为0.999 7和0.999 4,与单荧光RT-PCR相比,该引物和探针的双重体系混合对特异性和敏感性均未产生明显干扰。用已知VSV-NJ及VSV-IND阳性核酸验证,发现符合率为100%,对50份临床样品的检测均为阴性,与单荧光RT-PCR结果一致。本研究建立的双重荧光RT-PCR方法实现了VSV-NJ和VSV-IND的同步检测和鉴别,为水泡性口炎的防控提供了技术储备。

    • PCV4 SYBR Green I实时荧光定量PCR方法的建立及应用

      2020, 37(10):109-113. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.021

      摘要 (86) HTML (0) PDF 1.08 M (257) 评论 (0) 收藏

      摘要:为建立一种灵敏、可快速检测猪圆环病毒4型(PCV4)的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,根据PCV4 Rep基因的保守区域设计引物,建立针对PCV4的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行评价。结果显示,该检测方法的Ct值与标准品在5.64×102~5.64×109 copies/μL范围内呈良好的线性关系,R2为0.999,斜率为-3.638,检测下限为5.64×102 copies/μL,且无非特异性扩增。利用该方法对56份临床样品进行检测,发现PCV4核酸阳性率为3.57%,比普通PCR更灵敏可靠。结果表明,本试验建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法可用于PCV4的快速诊断。

    • 猪瘟病毒C株检测用国家核酸标准物质的研制

      2020, 37(10):114-120. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.022

      摘要 (89) HTML (0) PDF 787.54 K (265) 评论 (0) 收藏

      摘要:为研制均匀、稳定的猪瘟病毒(CSFV)核酸标准物质,选择CSFV C株接种于PK-15细胞并收获病毒液,然后经过病毒灭活、分装、冻干,最终形成核酸标准物质。用微滴式数字PCR对制备的CSFV标准物质进行均匀性和稳定性评估、标准物质合作定值,在评定不确定度后计算得出最终量值结果,并开展临床试用。结果显示,该标准物质均匀,4 ℃条件下可稳定存放4周,25 ℃可稳定存放1周,-20 ℃可稳定存放11个月,量值结果为(5.1±0.7)×105 copies/mg;临床试用显示,所制备的标准物质与临床样本的互通性良好。本研究制备的CSFV C株国家核酸标准物质均一性良好、稳定、量值准确度高,并通过了全国标准物质管理委员会评定,可用于动物及动物产品质量安全检测,从而有效保障猪瘟防治工作的开展。

    • 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

      2020, 37(10):121-126. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.023

      摘要 (95) HTML (0) PDF 1.00 M (275) 评论 (0) 收藏

      摘要:为体外表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)糖基化囊膜蛋白GP5,以及制备其多克隆抗体,以PRRSV PC疫苗株RNA为模板,应用RT-PCR扩增GP5基因,并克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达载体pET-32a-GP5。经过酶切和测序鉴定后,将阳性重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,加入IPTG低温诱导表达。使用亲和层析法纯化PRRSV GP5蛋白。然后将纯化的蛋白免疫北京大耳白兔制备多克隆抗体,并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光分析(IFA)。结果显示,表达的PRRSV GP5原核蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,相对分子质量大约30 kDa;制备的GP5蛋白多克隆抗体ELISA效价可达1:64 000;IFA检测显示,制备的多克隆抗体能够识别PRRSV。重组PRRSV GP5蛋白及其多克隆抗体的成功制备为PRRSV血清学检测方法的建立提供了良好的生物学材料。

    • 上海市门诊宠物猫和动物园流浪猫的猫疱疹病毒1型中和抗体检测

      2020, 37(10):127-130. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.024

      摘要 (78) HTML (0) PDF 988.60 K (272) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解临床中猫疱疹病毒1型(FHV-1)疫苗的免疫效果和流浪猫的FHV-1感染状况,利用临床分离株建立了FHV-1中和抗体检测方法,并对20份宠物门诊FHV-1免疫猫血清和10份未免疫的动物园流浪猫血清进行中和抗体检测。结果显示,免疫宠物猫和未免疫流浪猫的抗体阳性率均为60%。结果表明,上海市FHV-1疫苗免疫效果不佳,未免疫流浪猫FHV-1感染较严重。结果提示,需加强猫科动物的FHV-1免疫抗体监测,及时补免,同时加强流浪猫的管理、收容、免疫和监测。本研究为防控猫科动物FHV-1感染提供了参考。

    • 一起鹦鹉多重混合感染的诊治

      2020, 37(10):131-135. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.10.025

      摘要 (81) HTML (0) PDF 967.13 K (478) 评论 (0) 收藏

      摘要:2019年12月青岛市某鹦鹉养殖场发生大量鹦鹉幼雏死亡,雏鸟死亡率高达80%,患病鹦鹉表现出腹泻、发育迟缓等临床症状,成鸟几乎不发病。为探究引起鹦鹉发病的病因,综合发病情况、临床症状及病理剖检,以及相关病毒检测及细菌分离鉴定,确诊该场发生了鹦鹉喙羽病病毒(PBFDV)、禽多瘤病毒(APV)和链球菌的混合感染。根据药敏试验结果建议该场使用阿莫西林克拉维酸饮水5 d,并做好消毒工作,加强饲养管理,及时淘汰病鸟以降低经济损失。

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