鸭星状病毒3型RT-RAA快速检测方法的建立
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S855.3

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Establishment of a Rapid RT-RAA Assay for DAstV-3
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    摘要:

    鸭星状病毒是近年来危害我国鸭业发展的新发病原之一,给养鸭业造成了较大的经济损失,其中鸭星状病毒3型(DAstV-3)是近年来感染率较高的星状病毒。为实现DAstV-3的快速检测,根据DAstV-3的RNA依赖性核糖核酸聚合酶基因(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)设计特异性探针与引物,建立了DAstV-3的荧光RT-RAA检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性和临床适用性进行了评估。结果显示:建立的RT-RAA方法能够在39 ℃恒温条件下,在20 min内实现对DAstV-3的快速检测,与H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、鹅星状病毒、禽呼肠孤病毒等常见病毒均无交叉反应,最低检测限为101 copies/μL;临床样本检测发现RT-RAA方法阳性检出率高于常规RT-PCR方法,且检测时间较RT-PCR更短。结果表明,本研究建立的RT-RAA方法灵敏度高,特异性强,操作简便,临床适用性好,适合DAstV-3的现场快速检测。

    Abstract:

    Duck astrovirus is one of the emerging pathogens causing huge economic losses to duck industry,especially duck astrovirus-3(DAstV-3)with high infection rate in recent years. In order to rapidly detect DAstV-3,specific probe and primers were designed based on the RNA-dependent RNA polymerase(RdRp)gene of DAstV-3 to establish a fluorescent real-time recombinase aided amplification(RT-RAA)assay,followed by evaluation on its specificity,sensitivity,reproducibility and clinical applicability. The results showed that DAstV-3 could be rapidly detected by the established method within 20 min under the constant temperature of 39 ℃,while no cross reaction with H9 subtype avian influenza virus,Newcastle disease virus,goose astrovirus,avian reovirus and other common viruses was observed,and the minimum detection limit was 101 copies/μL;it was found that,by test of clinical samples,the established RT-RAA assay was with higher positive detection rate and shorter detection time compared to routine RT-PCR. In conclusion,the established RT-RAA assay was with high sensitivity,strong specificity,simple operation and good clinical applicability,which was suitable for rapid detection of DAstV-3 in the field.

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引用本文

邓春冉,张富友,尚佳静,罗娟,于晓慧,蒋文明,刘华雷,王一新,刘冠慧,徐丽娜,李阳.鸭星状病毒3型RT-RAA快速检测方法的建立[J].《中国动物检疫》编辑部,2022,39(11):105-110.

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