反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)快速检测基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒
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S855.3

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国家自然科学基金资助项目(31902303);江苏省高等学校大学生创新创业训练计划项目(202110324112H)


Rapid Detection of PRRSV-2 by RT-RAA
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    摘要:

    为建立一种基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的快速检测方法,根据其ORF6基因保守序列设计了3对特异性引物,通过引物筛选及条件优化,建立了基因2型PRRSV的反转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided isothermal amplification,RT-RAA)快速检测方法。结果显示:该方法在40 ℃恒温孵育25 min即可完成靶序列扩增;特异性强,和猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒均无交叉反应;灵敏度高,最低检出限为2×100 TCID50/μL,是常规RT-PCR方法的10倍;应用该方法对39份疑似PRRSV感染的临床样品进行检测,检出阳性样品25份,和实验室前期建立的荧光定量RT-PCR方法检测结果一致。以上结果说明,本研究建立的RT-RAA检测方法简便快速、特异性强、灵敏度高、临床适用性好,为PRRSV感染的快速诊断提供了新的技术手段。

    Abstract:

    In order to develop a rapid and simple method to detect porcine reproductive and respiratory syndrome virus genotype 2(PRRSV-2),3 pairs of primers were designed according to the conserved sequence of its ORF6 gene,and a reverse transcription recombinase-aided isothermal amplification(RT-RAA)assay was established with the optimal primers after optimizing theirs reaction conditions. The results showed that,by the method,target sequence could be amplified at 40 ℃ for 25 minutes;with its strong specificity,no cross-reaction with pseudorabies virus(PRV),porcine parvovirus(PPV),porcine circovirus type 2(PCV-2),transmissible gastroenteritis virus(TGEV)and porcine epidemic diarrhea virus(PEDV)was observed;with high sensitivity,the detection limit was 2×100 TCID50/μL,which was 10 times lower than traditional RT-PCR;39 clinical samples suspected of PRRSV infection were detected by the method,25 positive samples were identified,which was consistent with the results by the quantitative real-time RT-PCR established previously. In conclusion,the established method,with simple operation,strong specificity,high sensitivity and good clinical applicability,supported the rapid diagnosis of PRRSV infection as a new technical tool.

    参考文献
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    引证文献
引用本文

陈耀,仲欣雨,吴陈雨,丁雪,黄璟,王欢莉,范忠军,孙静,陈星逸,余树培,夏文龙,.反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)快速检测基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒[J].《中国动物检疫》编辑部,2023,40(1):121-127.

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  • 在线发布日期: 2023-01-10
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