• 2022年第39卷第11期文章目次
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    • 封面与目次

      2022, 39(11).

      摘要 (197) HTML (0) PDF 9.99 M (276) 评论 (0) 收藏

      摘要:

    • >流行病学
    • 湖北省襄阳市一起犊牛隐孢子虫病的暴发调查

      2022, 39(11):1-6. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.001

      摘要 (154) HTML (0) PDF 1.99 M (150) 评论 (0) 收藏

      摘要:2021年12月23日,湖北省襄阳市某养殖场饲养的犊牛出现白痢、黄痢、血便等腹泻症状并死亡,病牛经抗菌消炎治疗,效果不明显。为查明发病原因和可能的发病风险因素,湖北省联合襄阳市和保康县动物疫病控制部门组建调查组,开展了紧急流行病学调查。调查组综合现场调查和实验室检测结果以及干预措施效果推断:此次疫病暴发由隐孢子虫感染引起;病原由外购牛羊引入的可能性最大,也不排除周边野生动物传入的可能;犊牛感染后因饲养管理水平低下导致抵抗力下降,因天气寒冷等产生应激,造成发病死亡。对发病犊牛进行消炎、隔离保温和补液等对症治疗,同时提升生产管理和生物安全水平,随后疫病得到有效控制。本次调查为中小规模养牛场防治隐孢子虫病提供了参考。

    • 新疆和静县巴音布鲁克羊新孢子虫感染状况横断面研究

      2022, 39(11):7-11. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.002

      摘要 (126) HTML (0) PDF 684.33 K (159) 评论 (0) 收藏

      摘要:为估计新疆和静县巴音布鲁克羊新孢子虫流行率,了解其在羊群中的感染情况,通过横断面研究方法,采用两阶段抽样策略,在和静县下辖的12个乡镇中抽取67个养殖场点,采集1 340份血清样品,使用间接ELISA方法检测新孢子虫抗体;通过问卷调查,分析群间传播相关风险因素。抗体检测结果显示,和静县巴音布鲁克羊新孢子虫感染的群表观流行率为32.84%(95%CI:21.85%~45.40%),真实流行率为 36.05%(95%CI:24.93%~49.93%);12个乡镇中,有8个检出阳性场群。对问卷调查结果,进行卡方检验和Logistic回归分析发现,“饲养方式为舍饲”“建厂时间在6年以上”和“圈舍没有消毒”等因素具有统计学意义(P<0.05),为养殖场感染新孢子虫的主要风险因素。结果表明:新孢子虫在和静县巴音布鲁克羊群中流行普遍,流行范围较广;长时间舍内饲养、建厂时间久、卫生消毒管理差是导致新孢子虫流行的主要风险因素。因此,提高养殖场户饲养管理水平,定期对圈舍进行消毒并保证一定的空圈时间,可降低新孢子虫的感染风险。

    • 福建省宁化县山羊肠道寄生虫感染情况调查

      2022, 39(11):12-16. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.003

      摘要 (94) HTML (0) PDF 660.00 K (131) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解福建省宁化县山羊肠道寄生虫感染情况,采用饱和盐水漂浮法、自然沉淀法和麦克马斯特氏法,对采自宁化县8个乡镇16个羊场户的260份山羊粪便样品进行肠道寄生虫检查。结果显示:在8个场户的78份粪便样品中检出寄生虫虫卵或卵囊,平均场户寄生虫感染率为50.0%(8/16),个体寄生虫感染率为30.0%(78/260);检出线虫、球虫、吸虫3类寄生虫虫卵或卵囊,其中线虫个体感染率最高,为16.5%(43/260),虫卵数(EPG)为400~4 000,吸虫次之,为14.2%(37/260),EPG为500~1 000,球虫最低,为11.9%(31/260),卵囊数(OPG)为400~1 400,不同种类寄生虫个体感染率差异不显著(P>0.05);单一寄生虫感染占比为55.1%(43/78),混合感染占比为44.9%(35/78);水茜镇、曹坊镇、泉上镇个体感染率较高,均在80%以上,与其他乡镇差异显著(P≤0.05);放牧饲养场户的场群感染率为61.5%,个体感染率为60.9%,而舍饲场户均为0,不同饲养方式场户间感染率差异显著(P≤0.05);1岁以下山羊个体感染率为45.6%,1~2岁为28.6%,2岁以上为15.1%,不同年龄组间差异显著(P≤0.05);山羊未驱虫场户个体感染率为92.2%,已驱虫场户为14.8%,差异显著(P≤0.05),其中使用多种驱虫药的山羊群个体感染率为2.5%,而使用1~2种驱虫药的为27.9%~42.3%,差异显著(P≤0.05)。以上结果表明:宁化县山羊群中存在线虫、吸虫、球虫等多种肠道寄生虫感染,且以线虫感染为主;部分乡镇感染率高;放牧山羊及幼龄山羊感染较为严重;多种驱虫药联合使用的山羊群驱虫效果更佳。本调查结果为宁化县山羊肠道寄生虫病防控提供了科学依据和重要参考,提示养殖场户和主管部门通过改进饲养模式,制定科学驱虫方案,加强饲养管理和清洁消毒及联合用药等综合措施,可有效防控山羊肠道寄生虫病,提高山羊养殖效益。

    • 新疆吐鲁番市艾丁湖镇春季牛体表蜱种调查

      2022, 39(11):17-21. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.004

      摘要 (56) HTML (0) PDF 599.97 K (125) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解春季新疆吐鲁番市牛体表蜱寄生情况以及蜱种类和优势种群,选取艾丁湖镇牛养殖规模较大的5个村为试验点,采集牛体表吸血蜱虫,采用形态学鉴定方法进行蜱种属鉴定,采用SPSS 26.0 软件统计分析蜱种优势度及感染情况。结果显示:在100头牛体表共采集吸血蜱虫1 362只,经形态学鉴定,均为硬蜱科璃眼蜱属的亚洲璃眼蜱和小亚璃眼蜱。小亚璃眼蜱数量居多,占58.81%(801/1 362);蜱分布范围广,在每个村均有分布。大庄子村分布的蜱虫数量最多,占30.03%(409/1 362);西热木村最少,占8.44%(115/1 362)。小亚璃眼蜱在琼库勒村的相对优势度(Dr)最高,为68.92%(173/251),在花园村最低,为47.27%(191/404);亚洲璃眼蜱在花园村的Dr最高,为57.27%(213/404),在琼库勒村最低,为31.08%(78/251);小亚璃眼蜱在大庄子村的蜱指数(Im)最高,为12.75,而亚洲璃眼蜱在花园村最高,为10.65。运用SPSS 26.0 软件对不同试验点两蜱种的Dr进行卡方检验,结果小亚璃眼蜱在各试验点间没有显著性差异(P>0.05),而亚洲璃眼蜱存在显著性差异(P<0.05)。结果表明:该地区春季主要流行小亚璃眼蜱和亚洲璃眼蜱,且分布广泛,牛体表蜱感染较为严重。因此,春季应针对性加强璃眼蜱的驱虫工作,以降低人畜感染相关虫媒病原的风险。

    • 四川省攀西地区蜱携带立克次体检测及基因序列分析

      2022, 39(11):22-28. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.005

      摘要 (66) HTML (0) PDF 896.11 K (117) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解攀西地区蜱种类及蜱源立克次体的种类和感染状况,采用形态学和PCR方法,对随机采集自攀枝花和凉山州部分地区牛羊体表的252只蜱进行种类鉴定;利用特异性引物对立克次体ompA、gltA基因片段进行PCR扩增,随机选择阳性样本进行测序,并对测序序列进行分析,构建系统发育树。经种类鉴定,攀西地区存在微小扇头蜱和褐黄血蜱2种蜱种;蜱携带立克次体平均阳性率为29.37%(74/252),存在敬信立克次体暂定种(Candidatus Rickettsia jingxinensis)、立克次体共生菌(Rickettsia endosymbiont of Rhipilephalus microplus)、马赛立克次体(Rickettsia massiliae)共3种立克次体,其中敬信立克次体暂定种为优势种,共检出31份。不同县市的蜱携带立克次体阳性率不同,其中盐源县和昭觉县未检测到立克次体,而布拖县(57.14%)、西昌市(55.26%)阳性率较高;牛、羊体表蜱携带的立克次体阳性率分别为29.55%(26/88)和29.27%(48/164),差异不显著。结果表明,攀西地区存在多种蜱传立克次体,其分布范围较广,蜱携带率较高。结果提示,当地应做好蜱传立克次体病的防控,减少其对人和家畜的危害。

    • 宁夏某肉牛场牛呼吸道疾病综合征相关病原检测及分型鉴定

      2022, 39(11):29-34. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.006

      摘要 (72) HTML (0) PDF 891.92 K (124) 评论 (0) 收藏

      摘要:2022年3月冬春换季期间,宁夏某肉牛场暴发牛呼吸道疾病综合征(bovine respiratory disease complex,BRDC)。为了解造成此次病情的病原,采集12份发病牛的鼻腔深部棉拭子样品,采用PCR和RT-PCR方法,分别对牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛冠状病毒(BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛腺病毒3型病毒(BAdV-3)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛细小病毒(BPV)、多杀性巴氏杆菌(P. multocida)、溶血性曼氏杆菌(M. haemolytica,Mh)和牛支原体(M. bovis)共10种BRDC相关病原进行核酸检测。结果显示:共检出4种病原,其中BAdV-3和Mh的检出率均为100%,BCoV和BVDV检出率均为66.67%,其他病原均未检出;在12份牛鼻拭子样品中,存在BAdV-3+Mh、BAdV-3+Mh+BVDV、BAdV-3+Mh+BCoV和BAdV-3+Mh+BCoV+BVDV共4种不同组合形式的混合感染,混合感染率分别为16.67%、16.67%、25.00%和41.67%。对Mh和BVDV进行分型鉴定发现,该场流行的Mh为荚膜血清型A1型,BVDV为基因1a亚型。结果表明,该牛场发生的BRDC是由BAdV-3、BCoV、BVDV 1a亚型和Mh A1型等病原以不同组合形式混合感染所致。因此,牛场应加强生物安全管理和饲养管理,制定合理免疫程序,做好不同病原混合感染的综合防控。

    • >科学研究
    • 云南省部分地区牛冠状病毒检测及其N基因序列分析

      2022, 39(11):35-40. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.007

      摘要 (62) HTML (0) PDF 801.67 K (127) 评论 (0) 收藏

      摘要:为深入了解云南省牛冠状病毒(bovine coranarirus,BCoV)在不同地区、不同年龄牛群中的流行情况,2021—2022年采集大理、陆良、石林、寻甸等4个地区5家牛场不同年龄牛的粪便样品357份(腹泻样品61份、非腹泻样品296份)进行BCoV RT-PCR检测,并对BCoV阳性样品进行N基因测序分析。结果显示:在357份粪便样品中,检出BCoV阳性51份,总样品检出率为14.29%,5家牛场均有阳性检出,场阳性率为100%;1周龄、1周龄—1月龄、1~6月龄、1岁以上牛粪便样品的BCoV检出率分别为10.00%、19.23%、10.81%、17.31%;腹泻样品BCoV检出率为36.07%,非腹泻样品为9.78%。通过扩增得到4条完整的BCoV N基因序列;经同源性与遗传进化分析,4条N基因序列高度保守,相互间核苷酸同源性为99.0%~99.8%,与国内参考毒株处于同一小分支,亲缘关系近,核苷酸同源性为97.7%~99.9%,与美国4-17-03、7-16-23、4-17-25和日本GF2020等毒株处于同一个大分支且遗传距离较近;与美国原始毒株Mebus处于不同的大分支,亲缘关系较远,核苷酸同源性为98.1%~98.2%。结果表明:云南省牛群中可能广泛存在BCoV流行,1周龄—1月龄犊牛感染发病风险最高,调运或引种导致BCoV在国内传播的可能性较大。因此,需加强BCoV流行的监测与控制,严格进行检疫,加快疫苗研发和应用。

    • >公共卫生
    • 一起人布鲁氏菌病的畜间流行病学调查

      2022, 39(11):41-44. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.008

      摘要 (124) HTML (0) PDF 892.48 K (152) 评论 (0) 收藏

      摘要:2021年5月,湖南省长沙市发生一起人布鲁氏菌病疫情,确诊病例有共同暴露史,均接触或食用同一养殖场的羊胎衣。为确定疫情源头,防止疫情蔓延,消除疫情传播风险,通过现场走访询问、实验室检测等方式,对人确诊病例的共同暴露养殖场开展了畜间流行病学调查。调查结果显示:该养殖场饲养的山羊为外地调入且未经检疫,调入后出现疑似布鲁氏菌病症状并死亡;经实验室检测,存栏山羊的布鲁氏菌抗体阳性率为89.66%;相关人员普遍缺乏布病认知,防范意识不足,存在徒手接触羊流产物等情况,以及有食用羊胎衣的习俗。调查认为,养殖户外购未经检疫的羊是本次疫情的源头,相关人员布病防护意识低,对布病缺乏认知,导致感染。疫情确诊后,当地兽医主管部门按规定对存栏羊群进行全部扑杀和无害化处理,对栏舍进行全面彻底清洗消毒,依法查处违规调运等行为,使疫情得到有效控制。本次疫情警示,需要严格落实动物检疫和调运监管制度,做好监测预警,深化健康教育,提高群众自我防护意识,逐步净化消灭布病。

    • 一起山羊布鲁氏菌病疫情的流行病学调查

      2022, 39(11):45-48. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.009

      摘要 (88) HTML (0) PDF 1.35 M (153) 评论 (0) 收藏

      摘要:2021年6月,广西某县一羊场检出布鲁氏菌阳性,怀疑当地暴发了羊布鲁氏菌病疫情。为确定病因,控制疫情,减少损失,防止类似事件再次发生,采用现场访谈、实地调查、问卷调查、采样检测等方式开展了流行病学调查。调查发现:此次疫情涉及该县2个乡镇3个行政村10个养殖场户;这10个阳性场户间有流行病学关联,存在混牧、公羊共用和销售调运羊只等情况。调查认为,违规引种而引进感染动物,不按规定对调入动物实施隔离饲养,养殖户生物安全意识差,是本次布鲁氏菌病疫情发生的主要原因。本次疫情警示,相关防疫部门应加强防疫知识及相关法规的宣传教育,提高养殖场户的生物安全意识和依法落实防疫主体责任意识,加强隔离饲养,避免混牧和公羊共用,依法规范引种、调运动物等行为。

    • 基于文献的贵州省羊群布鲁氏菌感染情况分析

      2022, 39(11):49-55. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.010

      摘要 (81) HTML (0) PDF 1.49 M (134) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了解贵州省羊群布鲁氏菌感染情况,采用系统综述和Meta分析方法,对既往已发表文献的感染数据进行汇总分析。共纳入24篇中文文献进行定量分析,涉及506 843份样品。结果显示:贵州省羊群布鲁氏菌个体阳性率为2.0%(95%CI:1.5%~2.6%),群阳性率为6.0%(95%CI:3.0%~9.0%)。从地区看,黔东南州个体阳性率最高,为4.7%(95%CI:2.4%~6.9%),其次是毕节和铜仁;以5年为1个阶段,2001—2005年个体阳性率为2.2%(95%CI:0~6.2%),2005年后有所下降,2016—2020年维持在1.6%;从养殖场类型来看,商品场个体阳性率最高,其次是散养户和种畜场。研究表明,贵州省羊群布病防控情况不容乐观。建议开展“检疫、监测、消毒、扑杀、宣传”相结合的综合性防控措施,稳步推进当地布病净化工作。

    • >兽医管理
    • 移液工作站在兽医检测工作中的应用

      2022, 39(11):56-60. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.011

      摘要 (59) HTML (0) PDF 696.77 K (137) 评论 (0) 收藏

      摘要:移液工作站是完成高通量试验的必备工具之一,能帮助实验室构建标准化的试验流程,消除样品污染或损耗风险,保证结果的准确性、重复性及有效保障生物安全。本文介绍了目前在兽医检测领域较常用的移液工作站,阐明了其在动物疫病检测中具有结果准确、操作稳定、运行高效、安全性高等优势,也指出了工作站对样品处理要求高、价格昂贵、校准检定困难、维护难度大等难点,旨在为进一步提升兽医实验室的检测能力及向自动化方向发展提供信息参考。

    • 长沙市非洲猪瘟病毒核酸检测实验室现状调查

      2022, 39(11):61-56. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.012

      摘要 (66) HTML (0) PDF 1.24 M (139) 评论 (0) 收藏

      摘要:为全面了解非洲猪瘟检测实验室能力水平,长沙市动植物疫病预防控制中心通过问卷调查、能力比对和实地调研的方式,2019—2021年连续对基层非洲猪瘟检测实验室组织开展摸底调查。结果显示:长沙市具备非洲猪瘟检测能力的实验室共30家。其中:动物疫控机构实验室6家,承担主要监测任务;企业及第三方实验室24家,提供屠宰、监测、调运等方面检测数据,起到辅助作用。但县级以下基层实验室存在区域规划不合理、人员配置不足、生物安全管理体系不完善等问题。综上,实验室检测工作在非洲猪瘟防控上起到关键作用,但基层检测能力与生物安全管理水平仍有较大提升空间。

    • 2014—2021年云南省普洱市兽医系统实验室检测能力比对

      2022, 39(11):66-70. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.013

      摘要 (54) HTML (0) PDF 505.28 K (134) 评论 (0) 收藏

      摘要:为确保兽医系统实验室检测结果的科学性和准确性,普洱市动物疫病预防控制中心积极组织辖区内兽医系统实验室参与检测能力比对工作。2014—2021年,在全市共开展了44个比对项目检测。比对结果显示:参与检测能力比对的实验室数量由4个增至10个;市级动物疫病预防控制机构实验室、边境动物疫情监测站实验室和县(区)级动物疫病预防控制机构实验室的检测结果平均正确率分别为97.3%、95.7%、95.9%。以上结果表明,普洱市兽医系统实验室以考促建成效明显,整体检测水平较高,能够为动物疫病风险评估及防控体系提供有力支撑。针对现存的HA-HI检测能力薄弱、病原学检测能力不足等问题,建议相关部门培养专业素质强的实验工作人员,加大经费投入力度,加快管理体系建设,以进一步提升兽医系统实验室综合水平。

    • 一起未经检疫合格和指定通道向无规定动物疫病区输入动物案的思考

      2022, 39(11):71-73. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.014

      摘要 (132) HTML (0) PDF 481.19 K (163) 评论 (0) 收藏

      摘要:某市农业综合执法人员在执法检查中发现,当事人衣某涉嫌未经检疫合格和指定通道向无规定动物疫病区输入动物。经立案调查,认定当事人违法事实成立。根据《中华人民共和国动物防疫法》《无规定动物疫病区管理技术规范》及《动物检疫管理办法》依法给予衣某行政处罚。通过对案件事实认定,法律适用及行政相对人法律责任认定的讨论,提出严格规范电子出证工作,落实指定通道制度和落地报检制度,加强无疫区的建设和维护工作,加大无疫区违法案件的查处力度,进一步提升无疫区监管水平。

    • 欧亚经济联盟进出境动物检疫法律法规概述及与我国的比较

      2022, 39(11):74-79. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.015

      摘要 (56) HTML (0) PDF 659.80 K (133) 评论 (0) 收藏

      摘要:《关于海关联盟内采取兽医卫生检疫措施的规定》(海关联盟317号决议)是欧亚经济联盟关境内及联盟边境实施动物及动物产品检验检疫的主要法律依据。该决议中的一系列法规自2010年生效以来,历经多次修订。为更好地了解欧亚经济联盟进出境动物检疫制度,促进我国与联盟国家相关产品贸易开展,以海关联盟317号决议为依据,从进出境动物检疫对象、兽医检疫程序、联合检查和抽样、检疫要求、官方兽医检疫证书等方面,对欧亚经济联盟主要法律法规进行概述,并与我国进出境动植物检疫法进行比较,继而借鉴欧亚经济联盟先进做法,在区域化互认机制、统一检疫要求等方面,提出完善我国进出境动物检疫工作的建议。

    • >专论综述
    • CRISPR/Cas技术在动物疫病诊断中的应用

      2022, 39(11):80-88. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.016

      摘要 (65) HTML (0) PDF 897.88 K (138) 评论 (0) 收藏

      摘要:传统的动物疫病检测方法大多耗时长,操作复杂,对人员和仪器设备要求较高,不适用于基层动物疫病监测和初步筛查,因此开发灵敏度高、低成本、快速、便携,可实现现场诊断的病原检测新技术尤为重要。成簇规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白(CRISPR/Cas)作为一种适应性免疫系统,因其简单、高效的基因编辑能力,已被广泛用于动物疫病、植物育种、人类医学等领域。近年来,CRISPR/Cas系统得到不断发展,已被开发为一种分子诊断工具,在动物疫病诊断领域显示出巨大潜力。本文简要介绍了CRISPR/Cas系统的基本结构、分类和作用机制,重点阐述了其在动物病毒病、细菌病及寄生虫病等诊断领域的应用研究进展,旨在为相关领域研究提供参考。

    • 纳米抗体在口蹄疫防治中的研究进展

      2022, 39(11):89-95. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.017

      摘要 (70) HTML (0) PDF 789.58 K (144) 评论 (0) 收藏

      摘要:口蹄疫作为一种急性、热性和高度传染性疫病,目前尚缺乏长期有效且能完全抑制其病原的药物或疫苗。纳米抗体是一种新型基因工程抗体,具有生产成本低、与抗原亲和力高、特异性强、相对分子质量小等优点,且结构独特,因而成为对抗病毒的抗体之一,被用于某些病毒性疾病的预防及治疗。本文从纳米抗体的结构与特性、在口蹄疫诊断中的应用、在中和口蹄疫病毒中的作用以及在口蹄疫治疗中的展望等方面进行综述,探索其作为“探针”来诊断疾病的能力,以及将药物传递到机体内部,作为免疫抑制剂或治疗药物来中和病毒毒力的能力,以期为纳米抗体用于口蹄疫预防提供研发基础及创新思路。

    • 流行性出血病的全球流行及分布

      2022, 39(11):96-104. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.018

      摘要 (58) HTML (0) PDF 820.36 K (121) 评论 (0) 收藏

      摘要:流行性出血病(EHD)是由流行性出血病病毒(EHDV)引起的,经库蠓属媒介昆虫传播的非接触性传染病。根据世界动物卫生组织(WOAH)通报及相关文献报道,EHDV已在美洲、非洲、大洋洲、亚洲流行传播,流行范围逐渐扩大;欧洲虽尚未报告EHDV感染病例,但地中海周边亚非国家暴发的EHD疫情,对欧洲构成了较高的入侵风险。本文根据文献记载以及WOAH统计信息,综述了EHDV的病原学特征及其全球流行分布状况,据此提出了EHDV宿主规模逐渐扩大、传播方式发生变化、病毒基因发生重配、人为因素促进病毒变异、气候变化引起传播媒介活跃等风险因素。基于EHDV全球流行传播情况,针对性提出了我国防控EHD的建议,以期为有效防范EHD传入提供借鉴。

    • >技术支撑
    • 鸭星状病毒3型RT-RAA快速检测方法的建立

      2022, 39(11):105-110. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.019

      摘要 (47) HTML (0) PDF 1.73 M (133) 评论 (0) 收藏

      摘要:鸭星状病毒是近年来危害我国鸭业发展的新发病原之一,给养鸭业造成了较大的经济损失,其中鸭星状病毒3型(DAstV-3)是近年来感染率较高的星状病毒。为实现DAstV-3的快速检测,根据DAstV-3的RNA依赖性核糖核酸聚合酶基因(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)设计特异性探针与引物,建立了DAstV-3的荧光RT-RAA检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性和临床适用性进行了评估。结果显示:建立的RT-RAA方法能够在39 ℃恒温条件下,在20 min内实现对DAstV-3的快速检测,与H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、鹅星状病毒、禽呼肠孤病毒等常见病毒均无交叉反应,最低检测限为101 copies/μL;临床样本检测发现RT-RAA方法阳性检出率高于常规RT-PCR方法,且检测时间较RT-PCR更短。结果表明,本研究建立的RT-RAA方法灵敏度高,特异性强,操作简便,临床适用性好,适合DAstV-3的现场快速检测。

    • 猪圆环病毒2型和弓形虫双重PCR检测方法的建立及应用

      2022, 39(11):111-114. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.020

      摘要 (42) HTML (0) PDF 818.83 K (122) 评论 (0) 收藏

      摘要:为建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和弓形虫(Toxoplasma gondii)的双重PCR方法,根据GenBank上已登录的PCV2和弓形虫基因的保守序列,设计了2对特异性引物,并对反应体系及条件进行了优化。首先对单一PCR检测条件进行摸索,确定其最佳检测条件和灵敏性;进而建立两种病原的双重PCR检测方法,通过对退火温度、灵敏性和特异性进行测试,最终确定该方法的反应体系及条件。结果显示:双重PCR方法对PCV2和弓形虫的最低检出限分别为78.16和29.19 μg/mL;对伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)等均无扩增,特异性良好。利用该方法对来自川渝地区部分猪场的63份临床样本进行检测,并与单一PCR检测结果进行比对,两种方法的符合率为100%。以上结果说明,本试验建立的双重PCR方法灵敏度高、特异性强、结果可靠、方便经济,可用于PCV2和弓形虫的实验室快速检测。

    • 猪δ冠状病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

      2022, 39(11):115-120. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.021

      摘要 (60) HTML (0) PDF 1.29 M (129) 评论 (0) 收藏

      摘要:为灵敏、快速检测猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV),根据PDCoV M基因保守区域设计引物和探针,建立了一种PDCoV实时荧光RT-PCR检测方法,并评价了该方法的特异性、灵敏性和重复性。结果显示,该方法的拷贝数对数值与Ct值在1.3×103~1.3×107 copies/μL拷贝数浓度范围内呈现良好的线性关系,R2 = 0.994;最低检出限为13 copies/μL,且无非特异性扩增;批内和批间重复性试验变异系数(CV)为0.24%~2.15%,均小于3%。利用该方法和普通RT-PCR对42份临床样品同时进行检测,发现本方法比普通RT-PCR灵敏性更高,二者符合率为95.2%。以上结果表明,本试验建立的实时荧光RT-PCR方法灵敏、特异、可靠,可用于PDCoV的临床检测和流行病学调查。

    • 高敏荧光免疫层析分析法检测牛分枝杆菌抗体

      2022, 39(11):121-125. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.022

      摘要 (43) HTML (0) PDF 640.21 K (118) 评论 (0) 收藏

      摘要:为探究高敏荧光免疫层析分析法检测牛分枝杆菌(M. bovis)抗体的可行性,对该方法的特异性、灵敏性、稳定性及临床适用性进行了分析。特异性试验结果显示,该方法能够检出M. bovis抗体阳性血清参考品,而对布鲁氏菌阳性血清、O型口蹄疫阳性血清、A型口蹄疫阳性血清、样品稀释液、结核菌素皮内变态反应(TST)阴性牛血清样品等均为阴性;灵敏性试验结果显示,该方法最低可检测到3 200倍稀释的牛结核(bTB)强阳性血清参考品;稳定性试验结果显示,该方法检测bTB强阳性血清和阳性血清的变异系数分别为5.48%和5.83%;临床样本检测结果显示,该方法与IDEXX M. bovis ELISA抗体检测试剂盒的符合率为86.36%,具有较高的一致性,且差异不显著。以上结果表明,高敏荧光免疫层析分析法特异性强、灵敏度高、结果可靠,可作为TST检疫的补充抗体检测方法,用于bTB的诊断、检疫和净化。

    • 制备牛型结核菌素高压灭菌模型的建立与应用

      2022, 39(11):126-129. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.023

      摘要 (35) HTML (0) PDF 491.87 K (123) 评论 (0) 收藏

      摘要:为建立牛型结核菌素高压灭菌模型,验证生物安全三级实验室对大量培养的牛分枝杆菌的高压蒸汽灭菌效果,通过型式试验,优化排空、升温、灭菌和排气等阶段的各项参数,最终确认最佳灭菌参数,建立灭菌模型。结果显示:灭菌温度121 ℃、灭菌时间10 min、排空4次、排气压差12 kPa、冷却温度98 ℃时,满载的牛分枝杆菌灭菌效果最好。本研究建立了制备牛型结核菌素国家标准品的高压灭菌模型,保证了满载牛分枝杆菌的灭菌效果,为防范人兽共患病原菌扩散,改进牛型结核菌素提纯制备工艺作出了有益探索。

    • 奶牛免疫布鲁氏菌A19疫苗后的抗体变化和排菌情况监测

      2022, 39(11):130-135. DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.11.024

      摘要 (71) HTML (0) PDF 642.63 K (156) 评论 (0) 收藏

      摘要:为探究奶牛免疫布鲁氏菌A19疫苗(以下简称A19疫苗)后的抗体变化规律及向外排菌的风险,使用A19疫苗免疫30头3月龄奶牛,在首免和加强免疫后3个月内,通过虎红平板凝集试验(RBT)和试管凝集试验(SAT)进行抗体检测,采用荧光定量PCR方法,进行血液以及口鼻、阴道拭子的布鲁氏菌核酸检测。结果显示:首免后6 d,奶牛抗体开始出现阳转,60 d后绝大部分奶牛抗体转阴,而加强免疫后3 d,又出现抗体阳转;仅在首免后2 d内的阴道拭子和首免后6 d内的血液中检测到布鲁氏菌核酸,而在口鼻拭子中以及其他时间点的血液和阴道拭子中均未检测到布鲁氏菌核酸。结果表明,A19疫苗免疫奶牛抗体阳转快,排菌期短,安全性高。

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